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horbiger · 15-10-2010 , 13:54:11

INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA COMO PRUEBA ALTERNATIVA PARA LA CONFIRMACIÓN DIAGNÓSTICA DE INFECCIÓN POR VIH EN EL PERÚ
Valverde Ada, Romero Soledad, Cabezas César*

Resumen.-

Desde 1990 en el INS-Perú se viene utilizando la técnica de Western Blot (WB) para la confirmación del Diagnóstico de VIH. En este estudio se evalúa la prueba de Inmunofluorescencia indirecta (IFI) como una alternativa de confirmación al Western Blot. Se utilizaron 132 sueros de la seroteca de la División de Virología del INS-Perú con diagnóstico previo de VIH por WB. Para el diagnóstico de IFI se usó un Kit producido en el Centro Nacional de Referencia de SIDA (Chile-Argentina). De los 132 sueros procesados 56 (42,4%) correspondieron a Western Blot positivo, 52 (39,4%) a Western Blot negativos y 24 (18,2) con Western Blot indeterminado.

La sensibilidad y especificidad de la técnica IFI en comparación con la de Western Blot fue de 98,2% y 98% respectivamente. Los valores predictivo positivo y negativo fueron 98,2% y 100% respectivamente. Estos resultados permiten incorporar a la técnica de IFI como una prueba alternativa para la confirmación del diagnóstico de infección por VIH.

Palabras clave: VIH/SIDA, diagnóstico IFI.

Abstract.-

Since 1990, the National Institute of Health-Peru(INS) has performed the performed the Western blot technique to confirm HIV diagnosis. This study evaluates Indirect Inmunolluorescence test (IFI) as an alternative of confirmation by Western blot. One hundred and thirty-two sera from the Virology Serum Bank at INS previously tested by Western blot were submitted to IR testing using a kit produced at the AIDS National Reference Center (Chile-Argentina). A total of 56 (42,4%) of the 132 processed sera were Western blot positive, 52 (39,4%) were W. blot negative and 24 (18,2%) were W. blot indeterminate.

Sensitivity and specifity of the IFI test as compared to Western blot's was 98,2% and 98% respectively. Positive predective value was 98,2% and negative predictive value was 100%. These results allow us to add the IFI test as an alternate confirmation test for HIV.

Key word: HIV/AIDS, immunofluorescence, diagnostic, IFI.

Introducción.-

Desde la aparición del SIDA en el mundo en 1981, y luego del descubrimiento del VIH, se han venido desarrollando técnicas de diagnóstico para VIH [1]. Actualmente se cuenta con las técnicas rápidas, ELISA, Westem Blot (WB), Inmunofluorescencia (IFI), Radio inmuno precipitación (RIPA), reacción en cadena de la polimerasa (PCR) [4]; sin embargo en los países en vías de desarrollo, la aplicación de todas estas técnicas son limitadas. Para las pruebas de tamizaje se utilizan las pruebas rápidas y la técnica de ELISA, las cuales no están libres de resultados falsos positivos, pues tienen especificidad menor al 100% siendo necesaria la realización de pruebas confirmatorias como el WB e IFI.

Una técnica con alta sensibilidad y especificidad para la detección de anticuerpos contra VIH como el WB se viene utilizando en el Perú, sin embargo su alto costo impide que se le adopte como una técnica rutinaria de confirmación de la infección por el VIH.

Una técnica con alta sensibilidad y especificidad como la IFI es una prueba confirmatoria alternativa recomendada por la OMS [2], con la ventaja adicional de ser más económica que las otras pruebas confirmatorias. Siendo importante el desarrollo de tecnologías que se adapten a la realidad latinoamericana, en la IV Reunión de Directores de Laboratorios de Referencia de SIDA (Costa Rica 1991) [3,5] se mostró el interés de los países en el uso e implementación de la técnica de IFI como prueba suplementaria, siendo uno de los acuerdos que Chile-Argentina, produzcan y estandaricen los reactivos para IFI, para ser suministrados a 10 países latinoamericanos que soliciten participar en el "Proyecto de IFI para el diagnóstico de VIH en Latinoamérica", con el auspicio de la OPS/OMS. Dentro de este marco realizamos un estudio comparativo de las técnicas de IFI y WB en el Instituto Nacional de Salud del Perú, con el objetivo de considerar la incorporación de la técnica de IFI en la confirmación de infección por el VIH.

Materiales y Métodos.-

MUESTRAS BIOLÓGICAS

Se incluyeron para el estudio; 132 sueros que previamente habían sido procesados por la técnica del WB, procedentes de la seroteca de la división de Virología del Instituto Nacional de Salud, Perú.

Estos sueros fueron sometidos a la prueba de IFI, para lo cual se utilizó un Kit producido en el Centro Nacional de Referencia de SIDA (Argentina-Chile) del Lote 1-2-3-4 (Junio 1994). Dicho Kit contenía el Antígeno H9+ VIH Subtipo B, conjugado Cappel a la dilución 1/160 y dilución de muestra 1/10.

PRINCIPIOS DEL ENSAYO

Si en el suero del paciente existen anticuerpos anti VIH, estos se unirán al antígeno viral que está en las células adheridas al portaobjeto. Este complejo es detectado mediante la adición de anti-inmunoglobulina humana conjugada con fluoresceina al pocillo. Finalmente la reacción es observada mediante un microscopio de fluorescencia.

PROCEDIMIENTOS

Para el procedimiento se utilizó la técnica estandarizada para la realización de la prueba IFI [3], y para la lectura se utilizó un microscopio de fluorescencia de epiluminación marca Carl-Zeiss Jenamed, corredera de filtro 510 para luz ultravioleta y objetivos de 40x y 100x.

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

El suero control positivo presentaba fluorescencia en el 25% de las células con la morfología típica del antígeno. El suero control negativo y el control de PBS no presentaban fluorescencia. Para la interpretación se consideraron los siguientes criterios:

* Reacción positiva: Fluorescencia típica de membrana en el número correcto de células según control positivo (Fig. 1)

Fig. 1: Reacción Positiva en IFI.

* Reacción negativa: ausencia de fluorescencia. (Fig. 2)

Fig. 2: Reacción negativa en IFI.

* Reacción inespecífica: presencia de Fluorescencia en células infectadas y no infectadas que impide la interpretación correcta.

Resultados.-

De los 132 sueros incluidos, 56 (42,4%) correspondieron a WB positivos, 52 (39,4%) WB negativos y 24 (18,2%) a WB indeterminado. Los resultados comparativos del ensayo se muestran en la Tabla 1.

TABLA N°
Ensayo comparativo entre las pruebas de Western Blot e IFI.

IFIWestern BlotPositivoNegativoIndeterminadoPositivo
Negativo
Inespecífico55
0
0101
51
01
09
14TOTAL565224

La sensibilidad y especificidad de la prueba de IFI en comparación con la de WB fue de 98,2% y 98% respectivamente.

Los valores predictivo positivo y predictivo negativo fueron 98,2% y 100% respectivamente, para la misma comparación de dichas pruebas.

15-10-2010 , 13:54:11	#33
horbiger Denunciante Novato Me Gusta Estadisticas Mensajes: 489 Me Gusta Recibidos: 74 Me Gustas Dados: 47 Ingreso: 07 jul 2007 Temas Nominados a TDM Temas Nominados 0 Temas Ganadores: 0 Reputacion Poder de Credibilidad: 21 Puntos: 5109	Respuesta: fraude mentira "el vih" INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA COMO PRUEBA ALTERNATIVA PARA LA CONFIRMACIÓN DIAGNÓSTICA DE INFECCIÓN POR VIH EN EL PERÚ Valverde Ada, Romero Soledad, Cabezas César* Resumen.- Desde 1990 en el INS-Perú se viene utilizando la técnica de Western Blot (WB) para la confirmación del Diagnóstico de VIH. En este estudio se evalúa la prueba de Inmunofluorescencia indirecta (IFI) como una alternativa de confirmación al Western Blot. Se utilizaron 132 sueros de la seroteca de la División de Virología del INS-Perú con diagnóstico previo de VIH por WB. Para el diagnóstico de IFI se usó un Kit producido en el Centro Nacional de Referencia de SIDA (Chile-Argentina). De los 132 sueros procesados 56 (42,4%) correspondieron a Western Blot positivo, 52 (39,4%) a Western Blot negativos y 24 (18,2) con Western Blot indeterminado. La sensibilidad y especificidad de la técnica IFI en comparación con la de Western Blot fue de 98,2% y 98% respectivamente. Los valores predictivo positivo y negativo fueron 98,2% y 100% respectivamente. Estos resultados permiten incorporar a la técnica de IFI como una prueba alternativa para la confirmación del diagnóstico de infección por VIH. Palabras clave: VIH/SIDA, diagnóstico IFI. Abstract.- Since 1990, the National Institute of Health-Peru(INS) has performed the performed the Western blot technique to confirm HIV diagnosis. This study evaluates Indirect Inmunolluorescence test (IFI) as an alternative of confirmation by Western blot. One hundred and thirty-two sera from the Virology Serum Bank at INS previously tested by Western blot were submitted to IR testing using a kit produced at the AIDS National Reference Center (Chile-Argentina). A total of 56 (42,4%) of the 132 processed sera were Western blot positive, 52 (39,4%) were W. blot negative and 24 (18,2%) were W. blot indeterminate. Sensitivity and specifity of the IFI test as compared to Western blot's was 98,2% and 98% respectively. Positive predective value was 98,2% and negative predictive value was 100%. These results allow us to add the IFI test as an alternate confirmation test for HIV. Key word: HIV/AIDS, immunofluorescence, diagnostic, IFI. Introducción.- Desde la aparición del SIDA en el mundo en 1981, y luego del descubrimiento del VIH, se han venido desarrollando técnicas de diagnóstico para VIH [1]. Actualmente se cuenta con las técnicas rápidas, ELISA, Westem Blot (WB), Inmunofluorescencia (IFI), Radio inmuno precipitación (RIPA), reacción en cadena de la polimerasa (PCR) [4]; sin embargo en los países en vías de desarrollo, la aplicación de todas estas técnicas son limitadas. Para las pruebas de tamizaje se utilizan las pruebas rápidas y la técnica de ELISA, las cuales no están libres de resultados falsos positivos, pues tienen especificidad menor al 100% siendo necesaria la realización de pruebas confirmatorias como el WB e IFI. Una técnica con alta sensibilidad y especificidad para la detección de anticuerpos contra VIH como el WB se viene utilizando en el Perú, sin embargo su alto costo impide que se le adopte como una técnica rutinaria de confirmación de la infección por el VIH. Una técnica con alta sensibilidad y especificidad como la IFI es una prueba confirmatoria alternativa recomendada por la OMS [2], con la ventaja adicional de ser más económica que las otras pruebas confirmatorias. Siendo importante el desarrollo de tecnologías que se adapten a la realidad latinoamericana, en la IV Reunión de Directores de Laboratorios de Referencia de SIDA (Costa Rica 1991) [3,5] se mostró el interés de los países en el uso e implementación de la técnica de IFI como prueba suplementaria, siendo uno de los acuerdos que Chile-Argentina, produzcan y estandaricen los reactivos para IFI, para ser suministrados a 10 países latinoamericanos que soliciten participar en el "Proyecto de IFI para el diagnóstico de VIH en Latinoamérica", con el auspicio de la OPS/OMS. Dentro de este marco realizamos un estudio comparativo de las técnicas de IFI y WB en el Instituto Nacional de Salud del Perú, con el objetivo de considerar la incorporación de la técnica de IFI en la confirmación de infección por el VIH. Materiales y Métodos.- MUESTRAS BIOLÓGICAS Se incluyeron para el estudio; 132 sueros que previamente habían sido procesados por la técnica del WB, procedentes de la seroteca de la división de Virología del Instituto Nacional de Salud, Perú. Estos sueros fueron sometidos a la prueba de IFI, para lo cual se utilizó un Kit producido en el Centro Nacional de Referencia de SIDA (Argentina-Chile) del Lote 1-2-3-4 (Junio 1994). Dicho Kit contenía el Antígeno H9+ VIH Subtipo B, conjugado Cappel a la dilución 1/160 y dilución de muestra 1/10. PRINCIPIOS DEL ENSAYO Si en el suero del paciente existen anticuerpos anti VIH, estos se unirán al antígeno viral que está en las células adheridas al portaobjeto. Este complejo es detectado mediante la adición de anti-inmunoglobulina humana conjugada con fluoresceina al pocillo. Finalmente la reacción es observada mediante un microscopio de fluorescencia. PROCEDIMIENTOS Para el procedimiento se utilizó la técnica estandarizada para la realización de la prueba IFI [3], y para la lectura se utilizó un microscopio de fluorescencia de epiluminación marca Carl-Zeiss Jenamed, corredera de filtro 510 para luz ultravioleta y objetivos de 40x y 100x. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS El suero control positivo presentaba fluorescencia en el 25% de las células con la morfología típica del antígeno. El suero control negativo y el control de PBS no presentaban fluorescencia. Para la interpretación se consideraron los siguientes criterios: * Reacción positiva: Fluorescencia típica de membrana en el número correcto de células según control positivo (Fig. 1) Fig. 1: Reacción Positiva en IFI. * Reacción negativa: ausencia de fluorescencia. (Fig. 2) Fig. 2: Reacción negativa en IFI. * Reacción inespecífica: presencia de Fluorescencia en células infectadas y no infectadas que impide la interpretación correcta. Resultados.- De los 132 sueros incluidos, 56 (42,4%) correspondieron a WB positivos, 52 (39,4%) WB negativos y 24 (18,2%) a WB indeterminado. Los resultados comparativos del ensayo se muestran en la Tabla 1. TABLA N° Ensayo comparativo entre las pruebas de Western Blot e IFI. IFIWestern BlotPositivoNegativoIndeterminadoPositivo Negativo Inespecífico55 0 0101 51 01 09 14TOTAL565224 La sensibilidad y especificidad de la prueba de IFI en comparación con la de WB fue de 98,2% y 98% respectivamente. Los valores predictivo positivo y predictivo negativo fueron 98,2% y 100% respectivamente, para la misma comparación de dichas pruebas.